Matériel fréquemment demandé

Notre laboratoire a établi un panel complet de lignées cellulaires humaines dérivées de l'ostéosarcome U-2 OS permettant l'expression inductible des protéines du VHC. Les demandes doivent être adressées par écrit, avec une brève description du projet de recherche prévu et la confirmation que ces lignées cellulaires seront utilisées uniquement à des fins de recherche non commerciale dans votre laboratoire. Le cas échéant (voir liste ci-dessous), veuillez contacter le Dr Charles M. Rice à l'Université Rockefeller (Contact) pour un MTA pour le prototype H du VHC (J Virol 1993; 67: 1385) ou des clones consensuels d'ADNc (Science 1997; 277: 570).

Nous maintenons ces lignées cellulaires dans du milieu Eagle modifié par Dulbecco supplémenté avec 10% de FBS inactivé par la chaleur, 2 mM de glutamine, 500 µg/ml de G418, 1 µg/ml de puromycine et 1 µg/ml de tétracycline. Les milieux contenant de la tétracycline doivent être protégés de la lumière. Nous divisons les cellules 1:15 sur une base hebdomadaire. Pour l'entretien, les cellules sont toujours cultivées dans un milieu contenant de la tétracycline. Pour déréprimer les cellules, c'est-à-dire induire l'expression de la protéine VHC, nous les rinçons deux fois avec du PBS. Ceci devrait être fait avec une aspiration soigneuse de tous les milieux et des lavages puisque aussi peu que 0,01 µg/ml de tétracycline réprimera encore de façon marquée l'activité du promoteur dépendant du tTA. Nous vous suggérons de toujours diviser les cellules en milieu contenant de la tétracycline et de les laisser s'attacher et devenir environ 80-90% confluentes avant de les déréprimer. Après retrait de la tétracycline, les protéines du VHC deviennent détectables par immunoblot après 4-6 h et l'expression atteint un état stable après 24 (-48) h. On congèle les cellules dans 50% du milieu précité, 40% de FBS et 10% de DMSO à une densité de 1-5 Mio cellules/ml.