Matériel fréquemment demandé

Anticorps

NameSpecificityTypeSourceReference
C7-50HCV coreMouse IgG1Affinity BioReagents MA1-080Virology 1996;222:51
1B6HCV NS3Mouse IgG1Axxora ALX-803-059-R100J Virol 2000;74:2293
5B-3B1HCV NS5BMouse IgG2bAxxora ALX-803-060-R100J Biol Chem 2002;277:593
5B-12B7HCV NS5BMouse IgG2aAxxora ALX-803-061-R100J Biol Chem 2002;277:593

Lignées cellulaires

Notre laboratoire a établi un panel complet de lignées cellulaires humaines dérivées de l'ostéosarcome U-2 OS permettant l'expression inductible des protéines du VHC. Les demandes doivent être adressées par écrit, avec une brève description du projet de recherche prévu et la confirmation que ces lignées cellulaires seront utilisées uniquement à des fins de recherche non commerciale dans votre laboratoire. Le cas échéant (voir liste ci-dessous), veuillez contacter le Dr Charles M. Rice à l'Université Rockefeller (Contact) pour un MTA pour le prototype H du VHC (J Virol 1993; 67: 1385) ou des clones consensuels d'ADNc (Science 1997; 277: 570).

NomDescriptionRéférence
UTHCHCV core (gt 1b)Non publié
UTHHCV 5'NCR-core-part E1 (gt 1b, aa 1-326)Virology 1996;222:51
UTHLHCV 5'NCR-part core-luc (gt 1b, aa 1-82)Virology 1996;222:51
UTHCNS2HCV 5'NCR-core-part NS2 (gt 1b, aa 1-1134)Non publié
UTHCNS3HCV 5'NCR-core-part NS3 (gt 1b, aa 1-1523)BBRC 1998;246:920
UHCVHCV polyprotein (HCV H prototype clone)Hepatology 1998;28:192
UHCVconHCV polyprotein (HCV H consensus clone)J Biol Chem 2001;276:44052
UCconHCV core (HCV H con)Non publié
UE1E2conHCV E1E2 (HCV H con)Non publié
UCp7conHCV core-E1E2-p7 (HCV H con)Non publié
UNS3-5BconHCV NS3-NS5B (HCV H con)Non publié
UNS2conHCV NS2 (HCV H con)Non publié
UNS2-3conHCV NS2-part NS3 (HCV H con, aa 810-1227)Non publié
UNS3P201HCV part NS3 (HCV H prototype, aa 1027-1227)J Virol 2000;74:2293
UNS3-4AHCV NS3-4A (HCV H prototype)J Virol 2000;74:2293
UNS4AconHCV NS4A (HCV H con)Non publié
UNS4BconHCV NS4B (HCV H con)Virology 2001;284:70
UNS5AconHCV NS5A (HCV H con)J Biol Chem 2002;277:8130
UNS5BconHCV NS5B (HCV H con)J Biol Chem 2001;276:44052
UGFPGFPJ Biol Chem 2001;276:44052

Nous maintenons ces lignées cellulaires dans du milieu Eagle modifié par Dulbecco supplémenté avec 10% de FBS inactivé par la chaleur, 2 mM de glutamine, 500 µg/ml de G418, 1 µg/ml de puromycine et 1 µg/ml de tétracycline. Les milieux contenant de la tétracycline doivent être protégés de la lumière. Nous divisons les cellules 1:15 sur une base hebdomadaire. Pour l'entretien, les cellules sont toujours cultivées dans un milieu contenant de la tétracycline. Pour déréprimer les cellules, c'est-à-dire induire l'expression de la protéine VHC, nous les rinçons deux fois avec du PBS. Ceci devrait être fait avec une aspiration soigneuse de tous les milieux et des lavages puisque aussi peu que 0,01 µg/ml de tétracycline réprimera encore de façon marquée l'activité du promoteur dépendant du tTA. Nous vous suggérons de toujours diviser les cellules en milieu contenant de la tétracycline et de les laisser s'attacher et devenir environ 80-90% confluentes avant de les déréprimer. Après retrait de la tétracycline, les protéines du VHC deviennent détectables par immunoblot après 4-6 h et l'expression atteint un état stable après 24 (-48) h. On congèle les cellules dans 50% du milieu précité, 40% de FBS et 10% de DMSO à une densité de 1-5 Mio cellules/ml.

 Dernière mise à jour le 06/06/2018 à 15:39